Diabetologia：激活但功能损伤的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现去甲诱发加成到再次出现1DF肾病外科病患者的成效百余人在学童时期就有很好的叙述，多个去甲诱发加成白血病的学童里面有70%在血清切换后10年内入院肾病，而随访15年的学童这一%-增加到84%。相对之下，占多数外科1DF肾病一半以上的DF1DF肾病的患病机制还不会想得到充分的学绝技研究。

越来越多的人开始采用分段系统来判别1DF肾病的成效：幼体在再次出现多种去甲诱发加成时带入第1收尾，再次出现血压异常时带入第2收尾，再次出现病患者时带入第3收尾。一些多发去甲诱发加成白血病的幼体，在1期和2期，成效较迟，并发展为患病的1DF肾病。我们早先叙述了一一组在首次检查到多种去甲诱发加成抽取后至少10年无肾病的正因如此迟成效者，这一组病患者数目少，但构造非常明确。随后，我们发现去甲诱发免疫CD8+T细胞核加成在成效比较迟的病患者里面基本不实际上，但在更加进一步患病和长期实际上的肾病病患者里面很容易检查到。这可能指出，与成效病患者相对，这些病患者诱发加成的通气增强。

早期学绝技研究指出，尽管通气性T细胞核(Treg)数量正常，但肾病病患者实际上一些功能性缺陷，其里面以外对IL-2的加成能力增高。此外，肾病病患者里面的振荡CD4+T细胞核可能对通气正因如此具抵抗性，展示出为振荡T细胞核的诱导向西移动，自然显现出的Treg和体外显现出的诱导Treg，以及免疫经历的CD4+T细胞核里面IL-2加成向西移动。本学绝技研究的目的是叙述了CD4+通气性T细胞核(Treg)在一小群正因如此比较迟成效者里面的构造，他们的为数一组为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方式：BOX学绝技研究是一项以人群为基础的纵向学绝技研究，在21岁以下确诊的病患者亲属里面检查1DF肾病的危险因素。我们早先叙述了长期比较迟成效者的构造，他们始终保持多重去甲诱发加成白血病多达10年，但不会再次出现肾病的外科病患者，迟性或非透过性诱发。随后，10名此后始终保持无肾病并愿意提供大量血液抽取的比较迟成效者纳入T和B细胞核功能性研究。在在此之前的学绝技研究里面，8名迟成效者(SP一组)，里面位年龄一组43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的去甲诱发加成白血病。所有的发起者都处于1DF肾病成效的1期，尽管一些人随后失去了去甲诱发加成对某些免疫的白血病加成，然而，一名病患者早已处于2期至少6年，但不会再次出现外科病患者，一名病患者被诊断为肾病，该受试者72岁，在捕获实验抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据研究里面对该NAD透过了单独分析。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核绝技和T细胞核诱导试验分析NAD里面Treg的频百余人、表DF和功能性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、并不一定和回归)透过无监督聚类研究，分析Treg表DF。

结果：与心理健康NAD相对，来自迟成效体的知觉CD4+T细胞核的监督聚类辨识，激活的知觉CD4+ Treg频百余人增加，与糖皮质激素诱导的TNFR就其免疫(GITR)暗示增加有关。一名HbA1c升高的病患者与成效比较迟者和反之亦然的比对一组相对，Treg序有所各有不同。功能性研究指出，与心理健康NAD相对，来自比较迟成效体的Treg抑制的CD4+振荡T细胞核诱导引人注意受损。展示出为对振荡CD4+T细胞核CD25和CD134暗示的诱导增加。

平面图1 深入的表DF研究辨识，CD4+Treg亚DF在迟成效链表里面增加。由FlowSOM降解的Treg室，挤满在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据上标物暗示鉴定出10个元簇:知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)采用9个各有不同Treg上标降解的10个元簇的MST。每个节点代表者一个战略性(100个战略性)，更加大的元战略性(10个元战略性)在节点一组一处上色。每个节点里面的饼平面图回应单个上标的暗示级别。(b)每个元聚类的热平面图，以辨识主体上标暗示。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)降解平面图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的较厚。(e-l)相对之下总质量为每个metacluster装有直通平面图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP一组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞核(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞核(l)。红色边框代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一大写字母秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 采用CITRUS的预测模DF属实，Treg频百余人的增加是成效比较迟的标志。分级奈斯(a - f)和棉花研究(g-k)比较SP发起者和反之亦然的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的权威性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示透过分离，模拟FlowSOM个体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)一组以及NADSP 606(红色)里面CD25+ cd127的频百余人摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的装有直通平面图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突出的簇被辨识为SP和HD链表间的各有不同。(j)装有直通平面图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)一组里面，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对之下总质量(%-)。(k)直方平面图辨识每个簇的表DF(粉色)和Treg上标相对之下暗示与剧中暗示(紫色);上列，缓存Treg_3;比如说一行，缓存Treg_4。剧中与所有其他簇里面上标的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一大写字母秩检验

平面图3 与心理健康献血者相对，成效比较迟者知觉treg的GITR增加。每个知觉CD4+T细胞核元簇(知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个暗示上标的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的暗示热平面图(sp606不以外在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR暗示联结，辨识直方平面图(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon一对一大写字母秩和检验，p< 0.07(红色)所有NAD以外，p< 0.05(紫色)NADSP 606和反之亦然的HD不以外在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR暗示，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(红色)联结，辨识直方平面图(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一大写字母秩检验

平面图4 来自比较迟成效的CD4+ treg细胞核控制振荡CD4+T细胞核的能力增高。SP一组用紫色的直通和边框回应，HD一组用黑色的直通和边框回应，红色的直通/边框回应NADsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被上标为CFSE, Treg按通过观察的%-反应物。用抗CD3 /28微珠重置细胞核，人才3同一天透过流式细胞核绝技检查。(a-d)与CD4+反之亦然者相对之下应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导倍数。采用白血病比对(激活的响应细胞核内含treg)计算诱导倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 振荡CD4+T细胞核对比较迟成效的T细胞核重置的诱导更加敏感。SP一组用紫色的直通和边框回应，HD一组用黑色的直通和边框回应，红色的直通/边框回应NADsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel上标，treg按通过观察的%-反应物。用抗CD3 /28微珠重置细胞核，人才3同一天透过流式细胞核绝技(CD25反染)和细胞核因子研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者协同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导三份(b)。(c,d) CD25诱导三份(c)和CD134诱导三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才里面的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自比较迟成效子的重置知觉CD4+Treg在GITR暗示里面想得到了扩展和丰沛，阐释了进一步学绝技研究Treg在1DF肾病风险幼体里面的差异性的实质。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28